O teste ELISA detecta inúmeras doenças, razão pela qual encontrou ampla aplicação na medicina e muito mais. No entanto, o teste ELISA é mais conhecido por seu diagnóstico da doença de Lyme. O que é o teste ELISA? Como interpretar os resultados? Qual é o preço do teste?
Índice:
- Teste ELISA - o que ele detecta? Aplicação do teste ELISA
- Teste ELISA - qual é o teste?
- Teste ELISA e doença de Lyme - quando realizar?
- Teste ELISA - preço. Quanto custa um teste ELISA?
- Teste ELISA - resultados. Eles podem ser falsos positivos?
- Teste ELISA - resultados. Eles podem ser falsos negativos?
O teste ELISA, ou seja, o ensaio de imunoabsorção enzimática, é um método de laboratório comumente usado que serve, entre outros, para a detecção quantitativa de anticorpos no sangue.
Por esse motivo, o teste ELISA tem sido usado no diagnóstico de doenças bacterianas, como a borreliose de Lyme.
A vantagem do método ELISA é sua simplicidade, implementação rápida e alta sensibilidade. O método ELISA é realizado usando placas de plástico especiais com poços preenchidos com, por exemplo, proteínas de Borrelia (antígenos) e anticorpos monoclonais específicos, que são projetados para detectar anticorpos na amostra do paciente.
Teste ELISA - o que ele detecta? Aplicação do teste ELISA
A alta sensibilidade e simplicidade do método ELISA tornou-o aplicável no diagnóstico de muitas doenças, mas é mais conhecido como o método diagnóstico da doença de Lyme.
No caso do diagnóstico de borreliose de Lyme, a chamada ELISA indireto, que permite detectar IgM ou IgG específica no material testado. Da mesma forma, os anticorpos podem ser detectados para diagnóstico:
- infecções virais: vírus do herpes (herpes, vírus do herpes zoster, Epstein-Barr, citomegalovírus), HIV, vírus da hepatite (HBV e HCV)
- infecções por protozoários: toxoplasmose, giardíase
- doenças autoimunes: doença celíaca (anticorpos anti-tTG ou anti-DPG), doença de Hashimoto (anticorpos anti-TG e anti-TPO), doenças inflamatórias intestinais (anticorpos anti-ASCA e anti-ANCA)
- doenças parasitárias e alergias nas quais são detectados anticorpos IgE específicos. Seu nível elevado pode indicar a presença de alergias a, por exemplo, pólen e alimentos ou invasões parasitárias (tênia armada, lombriga humana)
Existem também modificações no método ELISA (o chamado ELISA sanduíche), que permite a detecção de uma amostra de proteínas diferentes de anticorpos. Então o objetivo do teste é detectar no material biológico:
- fragmentos de vírus ou bactérias, na maioria das vezes são antígenos característicos de um determinado patógeno
- hormônios séricos, por exemplo, estrogênio, prolactina, TSH, fT4, cortisol
- enzimas, por exemplo, calprotectina, elastase pancreática, fosfatase alcalina
- marcadores tumorais, por exemplo, CA-125
- a presença de drogas no soro
Este método também é aplicável na indústria de alimentos, onde pode detectar traços de alérgenos (por exemplo, leite, amendoim), OGM ou toxinas nos alimentos.
Teste ELISA - do que se trata?
O diagnóstico, por exemplo, da borreliose de Lyme pelo método ELISA consiste na detecção de proteínas imunes em material biológico - anticorpos que surgem durante a resposta aos antígenos de Borrelia.
Os anticorpos são testados em duas classes, IgM e IgG. Os IgMs são os primeiros anticorpos a aparecer no corpo quando entram em contato com bactérias e diminuem com o tempo.
Seu lugar é ocupado por anticorpos IgG mais persistentes que podem permanecer no corpo por várias dezenas de anos.
Desta forma, a presença de bactérias no corpo é indiretamente testada pela detecção de anticorpos dirigidos especificamente contra espiroquetas Borrelia.
Os anticorpos em vários estágios de infecção podem ser direcionados contra uma variedade de proteínas de Borrelia. Por exemplo, em um estágio inicial, é a proteína p41.
Nos estágios posteriores, mais e mais proteínas começam a aparecer, como p21, p30, p39, p43. Esta é a razão pela qual o diagnóstico da doença de Lyme é extremamente difícil.
A seleção de proteínas bacterianas é extremamente importante para que o teste tenha um alto valor diagnóstico. Portanto, rotineiramente no diagnóstico da doença de Lyme, testes ELISA de II ou III geração devem ser usados, nos quais conjuntos de proteínas são selecionados para obter o resultado mais confiável.
Teste ELISA e doença de Lyme. Quando fazer?
A borreliose de Lyme é uma doença bacteriana causada pela bactéria Borrelia burgdorferi e suas diversas variedades.
O diagnóstico da doença não é fácil devido à complexidade da resposta imunológica contra Borrelia e às imperfeições dos métodos laboratoriais.
O método laboratorial mais comumente usado é o método ELISA altamente sensível, que detecta anticorpos específicos criados contra proteínas bacterianas.
No diagnóstico da borreliose de Lyme, um método ELISA indireto é usado em que as seguintes etapas são distinguidas:
- incubação dos poços na placa com material recolhido do paciente, por exemplo, soro. Se houver anticorpos contra Borrelia no material testado, eles se ligam às proteínas no fundo do poço de reação
- então, o excesso de soro é enxaguado com um fluido de lavagem especial (tampão) e o chamado conjugado, ou seja, um anticorpo ligado a uma enzima que se liga a anticorpos previamente ligados nos poços de reação
- em seguida, o substrato para o conjugado é adicionado e ocorre uma reação de cor (resultado positivo) ou nenhuma reação de cor (resultado negativo)
- a última etapa é a leitura pelo leitor (espectrofotômetro) da concentração de anticorpos contra Borrelia no soro do paciente
O teste ELISA para a doença de Lyme é realizado com sangue e, no caso de sintomas neurológicos (neuroborreliose), também com líquido cefalorraquidiano.
O líquido sinovial não deve ser testado, pois há uma alta probabilidade de resultados falso-positivos.
A base para o diagnóstico da doença são os sintomas clínicos que a indicam, confirmados pelos resultados dos exames laboratoriais.
A adição de um resultado de teste laboratorial sem sintomas não autoriza o diagnóstico da doença de Lyme, pois foi demonstrado que anticorpos contra Borrelia também são detectados em pessoas saudáveis.
O diagnóstico sorológico da borreliose de Lyme começa com um teste de triagem semiquantitativo ELISA. Se o resultado for negativo, significa que nenhuma espiroqueta Borrelia foi detectada ou o resultado é um falso negativo.
Se o resultado for positivo ou fracamente positivo (duvidoso), teste confirmatório de Western blot, que é caracterizado por alta especificidade, deve ser realizado.
Isso é para confirmar que os resultados do ELISA são "verdadeiros". Durante o diagnóstico, você não pode pular nenhuma das etapas acima e, por exemplo, realizar um diagnóstico usando o método Western blot imediatamente ou fazer um diagnóstico baseado apenas em um resultado positivo de ELISA.
Na Polónia, o diagnóstico de borreliose de Lyme termina frequentemente na primeira fase de rastreio, o que causa uma interpretação errada de resultados positivos ou fracamente positivos.
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Teste de transformação de linfócitos (LTT). É bom saberTeste ELISA - preço. Quanto custa um teste ELISA?
O teste custa cerca de PLN 60 e é feito imediatamente. No entanto, você pode esperar cerca de três meses pelos resultados do encaminhamento.
Teste ELISA - resultados. Eles podem ser falsos positivos?
Resultados falsos positivos resultam da reatividade cruzada de anticorpos IgM com outras proteínas. Os anticorpos produzidos pelo corpo podem reconhecer "incorretamente" um antígeno de outros microrganismos como o antígeno Borrelia.
Os "erros" mais comuns ocorrem em pessoas infectadas com treponema pallidum (latim: Treponema pallidum), herpesvírus e em pessoas com lúpus eritematoso sistêmico e outras doenças reumáticas.
Teste ELISA - resultados. Eles podem ser falsos negativos?
Resultados falsos negativos podem aparecer em um estágio inicial da infecção, caso em que o teste deve ser repetido após cerca de 3-4 semanas. Isso é chamado janela sorológica, que é o período inicial de infecção em que o corpo ainda não "conseguiu" produzir anticorpos específicos.
Da mesma forma, em pessoas com imunodeficiência que não produzem anticorpos suficientes.
Um grande problema, principalmente em infecções muito intensas, é o aparecimento dos chamados complexos imunes que consistem em antígenos de espiroquetas Borrelia e anticorpos específicos para eles.
Como resultado, os anticorpos tornam-se "invisíveis" para métodos comumente usados, como ELISA, e embora estejam presentes no material testado, eles não podem ser detectados.
Nesses casos, o laboratório pode usar a decomposição de complexos imunes. Este tratamento é projetado para liberar os anticorpos. No entanto, esse método não é amplamente utilizado devido à falta de padronização em laboratórios.
Vale a pena saberPor que o diagnóstico da doença de Lyme não é fácil?
Isso se deve à complexidade da resposta imune contra Borrelia e às limitações dos métodos laboratoriais. A diversidade de variedades e o surgimento de novas variedades causadoras de infecções, especialmente no continente europeu, não facilitam o desenvolvimento de métodos diagnósticos eficazes.
Mais variedades surgiram recentemente na Europa, como Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana e Borrelia spielmanii. Além disso, no corpo, as espiroquetas Borrelia podem se transformar em cistos ou permanecer em locais inacessíveis às células do sistema imunológico.
Sendo assim "invisível" para o sistema imunológico. Além disso, foi demonstrado que os tecidos podem conter fragmentos de bactérias com propriedades fortemente pró-inflamatórias. Eles são considerados responsáveis pelos sintomas crônicos da doença de Lyme, apesar dos resultados negativos dos exames laboratoriais.
Literatura
1. Witecka-Knysz E. et al., Doença de Lyme: por que o diagnóstico é tão difícil? Laboratory Diagnostician April 2007.
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3. Diagnóstico laboratorial de doenças transmitidas por carrapatos. Recomendações do Grupo de Trabalho: Câmara Nacional de Diagnósticos de Laboratório, Instituto Nacional de Saúde Pública-Instituto Nacional de Higiene, Consultor Nacional na área de doenças infecciosas, Departamento de Doenças Infecciosas e Neuroinfecções, Universidade Médica de Białystok, Sociedade Polonesa de Virologia, Varsóvia 2014
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